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化妝品為什么需要測(cè)化學(xué)原料熒光素滲漏試驗(yàn)，目的為了預(yù)測(cè)和評(píng)價(jià)化妝品用水溶性化學(xué)原料對(duì)眼睛是否具有強(qiáng)刺激性或腐蝕性。

防腐劑廠家以下具體介紹化妝品用化學(xué)原料熒光素滲漏試驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞建模

1.細(xì)胞復(fù)蘇

2. 接種細(xì)胞于含10%胎牛血清且不含酚紅的DMEM-F12（1：1）混合培養(yǎng)液中，每天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，穩(wěn)定傳2代后準(zhǔn)備建模。

3.用胰酶-EDTA（0.05% w/v胰酶，0.02% w/v EDTA）消化細(xì)胞，收集細(xì)胞于離心管中，800～1000 rmp/min離心5 min，重新懸浮細(xì)胞于培養(yǎng)液中，調(diào)整細(xì)胞濃度為4×10⁵ 個(gè)/mL。

4.取無(wú)菌24孔板每孔加入400 μL新鮮培養(yǎng)基，將嵌入型細(xì)胞培養(yǎng)皿transwell（嵌入型細(xì)胞培養(yǎng)皿厚度為80～150 μm，孔徑約0.45μm）放入24孔板中，注意避免氣泡。其中21個(gè)transwell內(nèi)室中加入400μL 細(xì)胞懸液（終濃度約1.6×10⁵個(gè)/transwell），剩余3個(gè)transwell中加入同體積的培養(yǎng)液。將24孔板放入37 ℃ 5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)96 h 后，檢測(cè)前一天transwell內(nèi)外換新鮮培養(yǎng)液。

二、染毒和清洗

以400 μL/孔預(yù)熱至37 ℃的HBSS（無(wú)酚紅）清洗transwell內(nèi)室2遍。以200 μL/孔的受試物濃度梯度溶液進(jìn)行染毒，染毒時(shí)間為1 min，每個(gè)濃度做3個(gè)復(fù)孔，染毒后以400 μL/孔預(yù)熱至37 ℃的HBSS（無(wú)酚紅）清洗transwell內(nèi)室2遍。同時(shí)空白對(duì)照、陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照做相應(yīng)的處理。

以上是化妝品用化學(xué)原料熒光素滲漏試驗(yàn)步驟。

本文轉(zhuǎn)自國(guó)家藥品監(jiān)督管理局官網(wǎng)